焦磷酸测序检测CYP2C19基因多态性方法的建立

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摘要 [摘要] 目的建立一种基于焦磷酸测序技术的用于CYP2C19基因多态性快速检测的方法。方法选择2016年12月~2017年3月于贵州省人民医院行健康体检者50名，提取其基因组DNA，针对CYP2C19*2（681G>A）、CYP2C19*3（636G>A）、CYP2C19*17（-806C>T）3个单核苷酸多态性（SNP）位点分别设计一套PCR扩增引物和焦磷酸测序引物。将PCR扩增产物制备成单链测序模板，用Qiagen PyroMark Q24焦磷酸测序仪进行测序和基因型分析，采用Sanger一代测序技术对焦磷酸测序结果进行验证。结果根据出峰的碱基和峰高可清楚判断出3个SNP位点的不同基因型，检测结果与Sanger测序结果完全一致。50名健康体检者中检出CYP2C19超快代谢型1例，快代谢型22例，中代谢性22例，慢代谢型5例。结论本研究建立的焦磷酸测序检测CYP2C19基因多态性的方法具有快速、准确、成本低的特点，适用于临床实验室对CYP2C19基因多态性的分型。

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	杨楠楠1 徐琴1 罗振元2 付雪2 黄盛文2▲

关键词 ： CYP2C19, 基因多态性, 焦磷酸测序, 氯吡格雷

Abstract：[Abstract] Objective To establish a fast detection method for CYP2C19 genotyping based on pyrosequencing technology. Methods Genomic DNA was extracted from 50 blood samples of healthy subjects collected from December 2016 to March 2017 in Guizhou Provincial People′s Hospital, and a set of amplification primers and pyrophosphate sequencing primers were designed according to the single nucleotide polymorphism (SNP) sites of CYP2C19*2 (681G>A), CYP2C19*3 (636G>A), CYP2C19*17 (-806C>T). Single-stranded templates were made from PCR products, then sequencing and genotyping analysis were performed on a Qiagen PyroMark Q24 Sequencer System. The sequencing results were verified via Sanger sequencing. Results Based on the type and peak height of bases of DNA sequence, the genotypes of three SNPs could be identified clearly, which were consistent with Sanger sequencing results. Among the 50 samples of healthy group, 1 case was ultra-rapidmetabolism, 22 cases were rapidmetabolism, 22 cases were medium metabolism and 5 cases were slow metabolism. Conclusion The detection method of CYP2C19 polymorphism based on pyrosequencing technology is quick, accurate and convenient, which can be used to analyze the genotyping of CYP2C19 gene polymorphism.

Key words： CYP2C19 Gene polymorphism Pyrosequencing Clopidogrel

基金资助:[基金项目] 贵州省科技计划项目[黔科合平台人才（2016） 5670号]；贵州省贵阳市科技创新平台计划（[20161001]35号）。

引用本文:

杨楠楠1 徐琴1 罗振元2 付雪2 黄盛文2▲. 焦磷酸测序检测CYP2C19基因多态性方法的建立[J]. 中国医药导报, 2017, 14(29): 11-14.
YANG Nannan1 XU Qin1 LUO Zhenyuan2 FU Xue2 HUANG Shengwen2▲. Establishment of genotyping methods for polymorphisms of CYP2C19 gene based on pyrosequencing technology. 中国医药导报, 2017, 14(29): 11-14.

链接本文:

http://www.yiyaodaobao.com.cn/CN/ 或 http://www.yiyaodaobao.com.cn/CN/Y2017/V14/I29/11

[1] 马辉，胡增春，吕慧怡，等.CYP2C19基因多态性检测在PCI术后氯吡格雷用药中的研究[J].医学与哲学，2016， 37（8）：29-31.
[2] Saydam F，De■irmenci ■，Birdane A，et al. The CYP2C19*2 and CYP2C19*17 Polymorphisms play a Vital Role in Clopidogrel Responsiveness after Percutaneous Coronary Intervention：A Pharmacogenomics Study [J]. Basic Clin Pharmacol Toxicol，2017，37（8）：e48.
[3] Bonvini RF，Reny JL，Mach F，et al. Acute coronary syndrome and its antithrombotic treatment：focus on aspirin and clopidogrel resistance [J]. Curr Vasc Pharmacol，2009， 7（2）：198.
[4] Christiaens L，Macchi L. Monitoring of the antiplatelet drugs effect in patients with coronary artery disease：what is the real clinical impact?[J]. Curr Vasc Pharmacol，2007， 5（4）：293-301.
[5] Lau PS，Leong KV，Ong CE，et al. In Vitro Functional Characterisation of Cytochrome P450（CYP）2C19 Allelic Var?鄄iants CYP2C19*23 and CYP2C19*24 [J]. Biochem Genet，2016，18：1-15.
[6] Collet JP，Hulot JS，Pena A，et al. Cytochrome P450 2C19 polymorphism in young patients treated with clopidogrel after myocardial infarction：a cohort study [J]. Lancet，2008， 373（9660）：309-317.
[7] 付良青，黄丰，吴德政，等.中国汉族人群不同性别细胞色素氧化酶CYP2C19基因多态性的比较[J].药学学报，2004，39（3）：161-163.
[8] 翟万庆，杨丽娟，宋丽艳，等.缺血性卒中氯吡格雷治疗后病情进展与CYP2C19基因多态性的关系[J].山东医药，2016，56（33）：83-85.
[9] Sim SC，Risinger C，Dahl ML，et al. A common novel CYP 2C19 gene variant causes ultrarapid drug metabolism relevant for the drug response to proton pump inhibitors and antidepressants [J]. Clin Pharmacol Ther，2006，79（1）：103.
[10] Zou JJ，Xie HG，Chen SL，et al. Influence of CYP2C19 loss-of-function variants on the antiplatelet effects and cardiovascular events in clopidogrel-treated Chinese patients undergoing percutaneous coronary intervention [J]. Eur J Clin Pharmacol，2013，69（4）：771.
[11] Sibbing D，Stegherr J，Latz W，et al. Cytochrome P450 2C19 loss-of-function polymorphism and stent thrombosis following percutaneous coronary intervention [J]. Eur Heart J，2009，30（8）：916.
[12] 彭文星.急性冠脉综合征患者氯吡格雷抵抗与基因多态性关联性分析[D].北京：首都医科大学，2016.
[13] 贾政军，王华，彭向京，等.焦磷酸测序技术检测LAMA5 rs944895基因多态性方法的建立[J].中国临床药理学与治疗学，2011，16（6）：647-651.
[14] 李思勤，邹秉杰，王建平，等.焦磷酸测序测定SNP的常见问题与解决方法[J].现代生物医学进展，2014，14（12）：2219-2223.
[15] 万子睿，谢海棠，郭栋，等.焦磷酸测序技术检测SLCO 1B1基因多态性方法的建立[J].中国临床药理学与治疗学，2012，17（5）：543-548.
[16] 王谦，杜亚梅，张国军，等.焦磷酸测序法与Sanger测序法检测CYP2C19*17基因多态性方法学对比研究[J].中国医药生物技术，2014，9（3）：222-224.
[17] 王谦，杜亚梅，张国军，等.焦磷酸测序法和基因芯片法检测CYP2C19基因多态性的方法学比较[J].中华检验医学杂志，2014，37（8）：628-630.
[18] 项铮，刘云龙，邢晓清，等.全血改进线性指数聚合酶链式反应用于焦磷酸测序检测基因多态性[J].分析化学，2015，43（1）：55-62.
[19] 吕园，俞杨，张秀梅，等.南京及周边地区冠心病患者CYP2C19基因多态性分析[J].标记免疫分析与临床，2016， 23（10）：1139-1143.
[20] 国荣，刘淼，王宇玫，等.北京地区汉族冠心病患者CYP2 C19基因多态性分析[J].医学研究杂志，2015，44（11）：101-105.
[21] 王娟，苏明权，杨柳，等.西北地区530例临床患者CYP2 C19遗传多态性分析[J].中华临床医师杂志：电子版，2012，6（22）：7395-7397.